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CAR-T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)

更新時(shí)間：2023-02-01   點(diǎn)擊次數(shù)：521次

轉(zhuǎn)染試劑


穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是效應(yīng)T細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)CAR的前提。目前用于CAR-T的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法主要有逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)、慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)和mRNA轉(zhuǎn)染。

Mirus公司的TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑可提高載體轉(zhuǎn)染到貼壁或懸浮HEK 293細(xì)胞的效率，并有效提高重組腺相關(guān)病毒和慢病毒的產(chǎn)量。除了科研級(jí)別，Mirus還推出了臨床前級(jí)別的TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent。TransIT-VirusGEN®SELECT轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)于PEI和PEIpro®試劑，是臨床前和早期臨床試驗(yàn)中大規(guī)模病毒生產(chǎn)的理想選擇。Mirus也計(jì)劃推出GMP級(jí)別的TransIT-VirusGEN®轉(zhuǎn)染試劑。


產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：


高效 — 實(shí)現(xiàn)高滴度病毒大規(guī)模生產(chǎn)中DNA高效轉(zhuǎn)染

驗(yàn)證 — 經(jīng)測(cè)試確認(rèn)配方特性，無菌、低內(nèi)毒素水平、無支原體

靈活 — 可與不同的重組病毒平臺(tái)和細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)兼容

安全 — 完quan合成的配方，無動(dòng)物來源成分


CAR-T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)

分別使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (3:1, vol:wt), 25 kDa PEI (4:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1, Polyplus Transfection)將第三代載體pLKO.1-puro-CMVTurboGFP™和ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, Cell Bio Labs)( 3:0.5:0.5:2 DNA ratio, 1 μg/ml total plasmid DNA)轉(zhuǎn)染至FreeStyle™ F17培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)的FreeStyle™ 293-F細(xì)胞(A)和DMEM + 10% FBS中培養(yǎng)的貼壁293T/17細(xì)胞(C)生產(chǎn)慢病毒。用含病毒的上清液轉(zhuǎn)導(dǎo)293T/17細(xì)胞，并在轉(zhuǎn)導(dǎo) ® 72小時(shí)后用Guava Easycyte™ 5HT流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP表達(dá)情況。

CAR-T細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)

分別使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (2:1, vol:wt), 25 kDa PEI (2:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1 or 4:1, Polyplus Transfection)將pAAV-hrGFP, pAAV-RC和 pAAV Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 1.5 μg/ml plasmid DNA, Agilent Technologies)轉(zhuǎn)染 至FreeStyle™ F17培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)的FreeStyle™ 293-F細(xì)胞(B)及DMEM + 10% FBS中培養(yǎng)的貼壁293T/17細(xì)胞(D)生產(chǎn)腺相關(guān)病毒2型(AAV2)。用收集的病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)HT ® 1080細(xì)胞，轉(zhuǎn)導(dǎo)48h后用Guava easyCyte™ 5HT流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP表達(dá)情況。慢病毒和AAV的功能滴度都是根據(jù)GFP陽性細(xì)胞少于20%的病毒稀釋度計(jì)算的。

TransIT-VirusGEN SELECT在懸浮和貼壁細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中優(yōu)于25 kDa線性PEI和PEIpro 轉(zhuǎn)染試劑


品牌產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格
MirusbioMIR 6700TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent1.5 ml
MirusbioMIR 67030.3 ml
MirusbioMIR 67040.75 ml
Mirusbio

MIR 6705

5x1.5 ml
MirusbioMIR 670610x1.5 ml
MirusbioMIR 6730TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent 30 ml

美國品牌Cellbiolabs可提供一系列用于病毒表達(dá)、病毒包裝、病毒濃縮和純化、病毒滴度檢測(cè)的研究工具。


病毒純化試劑盒


品牌
產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品特點(diǎn)
Cell BiolabsVPK-5112PureVirus™ Adenovirus Purification Kit10 preps操作時(shí)間小于2小時(shí)，無需超速離心，回收率>60%~70%
Cell BiolabsVPK-099ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit10 preps使用特殊離心柱，操作時(shí)間小于2小時(shí)，回收率>90%
Cell BiolabsVPK-140ViraBind™ AAV Purification Kit10 preps

用于純化AAV-2與AAV-DJ，3小時(shí)內(nèi)獲得純度>95%的AAV病毒

Cell BiolabsVPK-140-T2 preps
Cell BiolabsVPK-141ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
2 preps用于純化AAV-2與AAV-D，J 3小時(shí)內(nèi)獲得純度>95%的AAV病毒，回收率>60%
Cell BiolabsVPK-141-510 preps


病毒滴度檢測(cè)試劑盒


品牌產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱規(guī)格產(chǎn)品特點(diǎn)
Cell Biolabs

VPK-107

VPK-107-5

VPK-107-T


QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit 

(Lentivirus-Associated p24 ELISA)

96 assays

5x96 assays

32 assays

專li技術(shù)將慢病毒相關(guān)p24蛋白與游離p24蛋白分開，避免傳統(tǒng)方法檢測(cè)總P24蛋白導(dǎo)致的誤差
Cell BiolabsVPK-112QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit20 assays

快速定量，操作過程45~60分鐘

可檢測(cè)純化前或純化后病毒核酸濃度

Cell BiolabsVPK-120QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit20 assays

快速定量，操作過程45~60分鐘

可檢測(cè)純化前或純化后病毒核酸濃度來定量病毒滴度


Cell BiolabsVPK-110QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit2x96 assaysELISA方法，無需空斑形成實(shí)驗(yàn)，避免復(fù)雜的鋪瓊

脂步驟，操作更簡(jiǎn)便，耗時(shí)更短

Cell BiolabsVPK-109

VPK-109-T

QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

100 assays

20 assays

免疫細(xì)胞化學(xué)方法，無需空斑形成實(shí)驗(yàn)，避免復(fù)

雜的鋪瓊脂步驟，操作更簡(jiǎn)便，耗時(shí)更短

Cell BiolabsVPK-106QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit20 assays

快速定量，操作過程45~60分鐘

可檢測(cè)純化前或純化后病毒核酸濃度來定量病毒滴度

Cell BiolabsVPK-145QuickTiter™ AAV Quantitation Kit20 assays快速定量，操作過程小于2小時(shí)


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