Jackson欣博盛生物精品推薦——Anti-Human IgE Antibodies

Jackson lmmunoResearch推出一系列適用于診斷試劑研發(fā)的Mouse Monoclonal Anti-Human IgE antibodies（小鼠抗人IgE單克隆抗體），補充了Jackson現(xiàn)有的抗人lgG、IgM和lgA抗體產(chǎn)品，抗人IgE可與一系列特定的報告分子偶聯(lián)（如堿性磷酸酶和生物素），使其具有極-強的靈敏度。

Jackson ImmunResearch Anti-Human IgE

Jackson ImmunoResearch可提供兩個不同克隆號（ME.114和ME.10A10）的抗人IgE抗體，均為小鼠來源的單克隆抗體，與人lgE反應(yīng)，并且是ε鏈特異的。

小鼠抗人IgE（Clone: ME.114, Cat#209-002-241）可與一系列報告分子偶聯(lián)，并可在多種實驗應(yīng)用中檢測人IgE，如ELISA、側(cè)向免疫層析、流式細胞術(shù)、WB和化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）。

小鼠抗人IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）是未標(biāo)記的純化抗體，在夾心法檢測中可作為捕獲抗體與標(biāo)記的抗人IgE抗體（Clone: ME.114）配對使用。

產(chǎn)品信息

特異性

Jackson ImmunoResearch抗人IgE ε鏈特異性抗體已通過ELISA測試，結(jié)果顯示該抗體對人IgG、IgM或IgA具有最小的交叉反應(yīng)性。圖1為驗證抗人IgE抗體（Clone: ME.114和ME.10A10）特異性的WB結(jié)果圖，結(jié)果顯示未檢測到其他類型的免疫球蛋白信號。Jackson未測試是否可以檢測到其他物種的免疫球蛋白。

圖1. 

A. 直接蛋白印跡顯示Anti-Human IgE antibody(ME.114)對人IgE的特異性。每孔分別上樣2ug純化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非還原條件下進行，并將蛋白質(zhì)印跡到硝化纖維素膜上。用含5%BSA的PBS/T封閉，并用HRP標(biāo)記的Anti-Human IgE（Cat#209-032-241）以1:10000稀釋孵育，使用ECL顯色。

B. 間接蛋白印跡顯示Anti-Human IgE antibody (10A10)抗人IgE（Clone: ME.10A10）對人IgE的特異性。每孔分別上樣250ng純化的人免疫球蛋白（IgE、IgG、IgA和IgM）。SDS-PAGE在非還原條件下進行，并將蛋白質(zhì)印跡到硝化纖維素膜上。用含5%BSA的PBS/T封閉，2ug/mL的Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）孵育。PBS/T洗滌后，用HRP標(biāo)記的抗小鼠IgG（Cat#715-035-150）以1:10000稀釋孵育，使用ECL顯色。

圖2. 

A. 在還原和非還原條件下使用Anti-Human IgE (clone number ME.114)檢測100ng純化人IgE的WB結(jié)果。

B. 在還原和非還原條件下使用Anti-Human IgE (clone number 10A10)檢測100ng純化人IgE的WB結(jié)果。

注：抗人IgE（Clone: ME.114）和抗人IgE（Clone: ME.10A10）對還原IgE表現(xiàn)出較弱的信號，因此不建議兩者用于檢測還原IgE。

靈敏度

Jackson ImmunoResearch抗人IgE抗體檢測各種來源的人IgE均具有優(yōu)異的靈敏度。圖3展示了Anti-Human IgE (clone number ME.114)在間接ELISA中檢測兩種不同濃度IgE包被板的靈敏度。圖4展示了Anti-Human IgE（Clone: ME.114）在間接ELISA中檢測不同骨髓瘤和血漿來源純化IgE的靈敏度。

圖3：間接法ELISA檢測人IgE。每孔加入100ul含2或0.2ug/ml的人血漿中純化的IgE的碳酸鹽包被緩沖液進行包被，4℃過夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161，不含IgG、蛋白酶）的PBS/T封閉2小時。用PBS/T將一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-244）以1:3在板上連續(xù)稀釋，并在室溫下孵育2小時。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071），用PBS/T中以1:20000稀釋，孵育1.5小時。加入TMB 30分鐘后在620nm處讀數(shù)。

圖4：間接法ELISA檢測不同來源的人IgE。每孔加入100ul含2ug/ml純化人IgE的碳酸鹽包被緩沖液進行包被，4℃過夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T在室溫下封閉2小時。用PBS/T將一抗Anti-Human IgE（Cat#209-002-241）以1:3在板上連續(xù)稀釋，并在室溫下孵育1小時。二抗Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG, Fcγ fragment specific (min X Hu, Bov, Hrs Sr Prot)（Cat#115-035-071）以1:20000稀釋，孵育1.5小時。加入TMB 30分鐘后在620nm處讀數(shù)。 

檢測血漿中IgE

Jackson ImmunoResearch抗人IgE與其配對的捕獲抗體配合用于夾心法ELISA時具有極-好的靈敏度。兩種不同的單克隆抗體可以配對使用以進行捕獲和檢測。在這種情況下，用牛血清白蛋白（Cat#001-000-161，不含IgG與蛋白酶）封閉前，使用未標(biāo)記的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）作為包被抗體，洗滌后，與稀釋后的樣品一起孵育。選擇標(biāo)記的Anti-Human IgE antibody，例如Alkaline Phosphatase Anti-Human IgE (Cat#209-052-241)，或者Peroxidase Anti-Human IgE (Cat#209-032-241)，接著使用合適的底物或顯色技術(shù)。圖5展示了直接夾心法ELISA驗證非偶聯(lián)的抗人IgE與堿性磷酸酶標(biāo)記的檢測抗體搭配使用來定量檢測患者樣本中的總IgE。本實驗中使用樣本的總IgE（kIU/l）已通過羅氏Cobas Total IgE assay檢測（結(jié)果詳見圖5的X軸）。

圖5. 直接夾心法ELISA檢測人血清和血漿樣品中的總IgE。用2ug/ml未標(biāo)記的Anti-Human IgE（Clone: ME.10A10，Cat#209-002-244）包板，100μl/孔，4℃過夜。每孔加入300ul含1%BSA（Cat#001-000-161）的PBS/T（0.05%吐溫）封閉1.5小時，隨后加入用PBS/T以1:80稀釋的樣品孵育1小時，100ul/孔。檢測抗體，堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗人IgE（Cat#209-055-241），用PBS/T中以1:10000稀釋，100ul/孔孵育1小時。每孔加入100ul 新鮮配制的DEA底物孵育30分鐘，在405nm處讀數(shù)。

推薦稀釋倍數(shù)

下表中的建議稀釋倍數(shù)用范圍表示，因為最佳的稀釋度與許多因素有關(guān)，如抗原密度，滲透性等。使用者應(yīng)根據(jù)自己的實驗來確定抗體最佳的工作濃度。

*請注意，當(dāng)檢測還原性蛋白質(zhì)時，該抗體將給出較弱的信號，因此不建議用于需要通過蛋白質(zhì)印跡檢測還原IgE的應(yīng)用。

參考文獻

1. Cox, L., Larenas-Linnemann, D., Lockey, R. and Passalacqua, G., 2010. Speaking the same language: The World Allergy Organization Subcutaneous Immunotherapy Systemic Reaction Grading System. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 125(3), pp.569-574.e7.

2. Pawankar, R., Canonica, G., Holgate, S., and Lockey, R., 2011. World Allergy Organization (WAO) white book on allergy. United Kingdom: WAO.

3. Sánchez-Borges, M., Ansotegui, I. & Cox, L. World Allergy Organization Grading System for Systemic Allergic Reactions: it Is Time to Speak the Same Language When it Comes to Allergic Reactions. Curr Treat Options Allergy 6, 388–395 (2019). 

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